miércoles, 28 de enero de 2015

Aplicaciones de la inmunohistoquímica

Aplicaciones de la Inmunohistoquímica
Dr. Roberto de León C. *
Dr. Jorge Platt G. **
Dr. Minor R. Cordero B. ***

 
La inmunohistoquimica identifica el origen de las células y tejidos en frotis o en cortes histológicos, mediante técnicas inmunológicas 1.
Las células producen proteínas que actúan como antígenos los cuales aplicados a seres vivos (ratas, conejos, etc.) estimulan la producción de anticuerpos. Al aplicarse estos reconocen el antígeno utilizado en su producción. En histología no se visualizaban estos complejos antígeno-anticuerpo, porque son moléculas muy pequeñas e incoloras.
La inmunohistoquímica se empieza a desarrollar cuando a Coons,2 se le ocurrió añadirle fluoresceína, a las moléculas del anticuerpo y observar los cortes de los tejidos en el microscopio con luz ultravioleta, estas técnicas se usan en la actualidad sobre todo en cortes de riñón, piel y en ganglios linfáticos, tienen el inconveniente de que se requiere tejido en fresco y las preparaciones son temporales, ya que la fluorescencia se pierde. 3
La aplicación más importante de la inmunohistoquímica, es en oncología9, nos permite identificar el origen del tumor, en ocasiones podemos diferenciar entre hiperplasia benigna y neoplasia maligna (en linfomas por ejemplo), también nos permite inferir sobre la respuesta a tratamiento, tiempo libre de recurrencia y el pronóstico (por ejemplo en glándula mamaria).
En oncología, el patólogo debe hacer el diagnóstico de tumor maligno en cortes de tejido teñidos con HE y las tinciones especiales que se requieran, en seguida se analizará que anticuerpos se necesitan de primera línea para diagnósticos diferenciales, después, si es necesario, se aplicarán otros para completar el estudio. La razón de proceder de esta manera y no rutinariamente ordenar baterías de gran número de anticuerpos, es por sus costos, los cuales pueden ser muy altos en relación con su efectividad.
Al interpretar los resultados, se deben considerar las siguientes causas de falsos negativos: Anticuerpo inadecuado: por estar caduco, degradado o por dilución inadecuada. Pérdida de antígenos: por difusión o por necrosis del tejido. Densidad menor del antígeno: en relación con la capacidad de detección (rápida liberación). Aun con controles positivos, los resultados negativos no deben descartar en forma absoluta el diagnóstico histopatológico y clínico.
Los resultados falsos positivos son más peligrosos y pueden deberse a: Reactividad cruzada. Unión inespecífica con el antígeno buscado. Presencia de peroxidasa endógena. Atrapamiento de células normales, entre células tumorales.
Anticuerpos para la identificación de tumores.
Existen anticuerpos muy sensibles y específicos que nos permiten identificar con seguridad tumores primarios y metastásicos, por ejemplo la gonadotrofina coriónica nos permite el diagnóstico de coriocarcinoma y de tumores germinales del testículo, el antígeno prostático específico, nos hace el diagnóstico de cáncer de próstata (Fig. 1) aunque es ocasionalmente positivo en glándula mamaria masculina y femenina11. La tiroglobulina es positiva en tumores de glándula tiroides12.
También es muy común el uso de desmina para músculo liso, desmina y mioglobina para músculo estriado, proteína S-100 para melanomas y tumores de origen neural.
Para poder clasificar los linfomas, es indispensable el uso de anticuerpos que nos permitan diferenciar entre hiperplasias y linfomas, entre tumor de Hodgkin y linfomas no Hodgkin, de estos podemos distinguir los centrofoliculares, de los linfomas del manto, los marginales o los linfomas de tipo Malt. Además separamos los linfomas B de los T14. En las leucemias mieloides y linfoides es indispensable la inmuno para identificar los diferentes tipos15.

Fig 1: Sección de próstata normal con
epitelio   de   los   acinis   positivo para
anticuerpos contra antígeno   prostático
específico. 100 x.

Fig. 2: Sección de páncreas   normal con
islote   de   Langerhans    con    células
positivas a anticuerpos contra insulina. 100 x.
Existen tumores malignos en los cuales es necesario utilizar anticuerpos para investigar el curso biológico del tumor, su sensibilidad o resistencia a medicamentos y el tiempo libre de enfermedad después de recurrencia. Cuando sucede una mutación de p53 que ya no cumple su función normal y permite el desarrollo de un tumor maligno. Esta proteína tiene una vida media prolongada, por lo cual es detectable por inmunohistoquímica. La proteína p53, es el gen mutado que con más frecuencia se encuentra en carcinomas de mama, vejiga, próstata, pulmón, hígado y colon. Se ha encontrado correlación entre la presencia del p53 mutado y la progresión del tumor, por tanto, su presencia se considera como factor de mal pronóstico.16,17,18
En cáncer mamario es importante el oncogene HER-2 / neu (es el mismo conocido como c-erbB-2), se ha demostrado que hay sobreexpresión de estos oncogenes en el 30 % del cáncer mamario. Se detecta en inmunohistoquímica por tinción de su membrana. Sirve para predecir el tiempo de recurrencia, indica también una resistencia relativa a la quimioterapia. Es de mal pronóstico en pacientes con ganglios axilares positivos y en algunas pacientes con carcinoma infiltrante y ganglios negativos. 19, 20, 21,22
Los receptores de estrógenos y de progesterona positivos en cáncer mamario, son de buen pronóstico, indican que puede haber una buena respuesta a tratamiento hormonal. En los casos con receptores negativo hay alto grado de recurrencia con sobrevida mas corta. (Tabla 10) 27,28
La inmunohistoquímica es un arma poderosa, que nos ayuda a resolver múltiples problemas de diagnóstico. Los cuadros que se incluyen, son una ayuda práctica para orientar la selección de los anticuerpos que se requieren, en la identificación de los tumores más comunes.
Tabla 1. Tumor de células germinales
  
CK 
HPLAP 
AFP 
HCG 
Seminoma 
+ 
+ 
+/- 
- 

Ca Embrionario 
+ 
+ 
- 
- 

Tumor Saco Vitelino 
+ 
+ 
+ 
- 

Cariocarcinoma 
+ 
+ 
+ 
+ 


 
Tabla 3. Tumores indiferenciados
  
Carcinoma  
Melanoma  
Linfoma  
Cel. Germ  
Citoqueratina 
+ 
- 
- 
+/- 

EMA 
+ 
- 
- 
- 

S-100 
+/- 
+ 
- 
- 

HMB45 
- 
+ 
- 
- 

LCA 
- 
- 
+ 
- 

HPLAP 
+/- 
- 
- 
+ 

Tabla 5. Linfoma de células pequeñas
 
CD5  
CD23  
CyclinD1  
CD10  
Bcl-2  
Ki-67  
Linfoma infocitico
de células pequeñas
+ 
+ 
- 
- 
+ 
Bajo 

Linfoma Folicular 
- 
- 
- 
+ 
+ 
Bajo 

Linfoma de células
de el manto
+ 
- 
+ 
- 
+ 
Intermedio-alto 

MALT 
- 
- 
- 
- 
+ 
Bajo 


Tabla. 10. Carcinoma mamario anticuerpos con valor pronóstico
ANTICUERPO 
% de TINCION
del tumor
PRONOSTICO 
ER 
NEGATIVO 
DESFAVORABLE 
 
PR 
NEGATIVO 
DESFAVORABLE 

Ki 67 
40 % POSITIVO 
DESFAVORABLE 

Her-neu 
90%POSITIVO 
DESFAVORABLE 

P 53 
40% POSITIVO 
DESFAVORABLE 

Catepsin D 
80% POSITIVO 
DESFAVORABLE 

EGFR 
FUERTE 
DESFAVORABLE 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Taylor C.R. Immunohistologic Techniques in Surgical Pathology. A Spectrum of "New" Special Steins. Hum Path 1981 ;12: 590-96 .
Taylor C.R. Chir B and Phil D. Immunoperoxidase Technics. Arch Pathol Med 1978 ;102 : 113-21.
Nadji M.,Morales A. Immunoperoxidase: Part I .The Technique and its Pitfalls. Lab Med 1983 ; 14 : 767-71.
Nadji M.,Morales A. Immunoperoxidase: Part II. Practical Applications. Lab Med 1984 ; 15 : 33-37 .
Taylor C., Phil D. The Total Test Approach to Standardization of immunohistochemistry. Arch Patthol Lab Med 2000 ;124 : 945-954 .
Gowen A.M.,Vogel A.M : Monoclonal antibodies to human intermediate filament proteins . II. Distribution of filaments proteins in normal human tissues. Am J Pathol 1984; 114 (2): 309-2
Prophet E.B. Arrington J. Sobin L. Laboratory Methods in Histotechnology. Armed Forces Institute of Pathology. 1992.
Brooks J.J. Immunohistochemistry of soft tissue tumors progress and prospects. Human Pathol 1982; 13: 969-974.
Raab S.S. The cost- effectiveness of Immunohistochemistry. Arch Pathol Lab Med 2000; 124: 1185-1191.
Albores-Saavedra J. Nadji M. Civantos F. Morales A. Thiroglobulin in Carcinoma of the Thyroid. Hum Pathol 1983 ; 14: 62-66 .
Gown A.M. Cost-Effective Immunohistochemistry. Short Course # 13. HANDOUT. 1996.
Brunning R.D. McKenna R.W. Atlas of Tumor Pathology. Tumors of the Bon Marrow. Third Series. Armed Forces Institute of Pathology. 1993.
Drobnjak,M. et al: p53 and Rb Alterations in Primary Breast Carcinoma:Correlation with Receptor Expression and Lymph Node Metastases. Intl J Oncol 1993 ; 2 : 173-178 .
Hollstein,M. et al.: p53 Mutations in Human Cancers. Science 1991; 253: 49-53.
Thor, A D. et al.: Accumulation of p53 Tumor Supressor Gene Marker for Prognosis in Breast Cancers. J Natl Cancer Inst 1992 ; 84: 845-855 .
Veronese,S.M. et al. Detection of Ki-67 Proliferation Rate in Breast Cancer. Correlation with Clinical and Pathological Features. Am J Clin Pathol 1991; 95 : 30-34.
Muss H:B: et al. : c-erbB-2 Expression and Response to Adjuvant Therapy in Women with Node Positive Early Breast Cancer. N Engl J Med 1994 ; 330 : 1260-1266.
Tetu, B. et al : Prognostic significance of HER-2/neu Oncoprotein expression in node positive Breast Cancer ; the Influence of the Pattern of Immunostaining and Adjuvant Therapy . Cancer 1994 ; 73: 2359-65 .
Toikkanen.S et al : Prognostic significance of HER-2 Oncoprotein Expression in Breast Cancer: A 30 Year Follow up . J Clin Oncol 1992 ; 10: 1044-1048.
Ravdin ,P.M. et al: Cathepsin D By Western Blotting and Immuno -histochemistry: Failure to Confirm Correlations with Prognosis in Node-Negative Breast Cancer . J Clin Oncol 1994 ; 12 (3) : 467-47
Armas, O.A.et al : Immunohistochemical Detection of Cathepsin D inT2,N0,MO Breast Carcinoma . Am J Surg Pathol 1994 ;18(2): 158-166.
Tandom, A.T. et al: Cathepsin D and Prognosis in Breast Cancer. N Engl J Med 1990 ; 322: 297-302.
Henrry J. A. et al : Prognostic Significance of the Estrogen-Regulated Protein, Cathepsin D in Breast Cancer : An Immunohistochemical Study. Cancer 1990; 65 : 265-271.
Battifora H. et al : Immunohistochemistry of Hormone Receptor in Routinely Processed Tissue : The New Gold Standard. Appl Imunohistochemistry 1994; 2 (3) : 143-145.
Miller R. et al: Immunocytochemical Assay for Estrogen Receptor with Monoclonal Antibody D753P in Routinely ¨Processed Formaldehyde-Fixed Breast Tissue. Cancer 1993 ; 71: 11.

No hay comentarios.:

Publicar un comentario